Page 111 - Revista de Citricultura Eureka! Noviembre 2021

NOTAS TÉCNICAS

Identificación de estados inmaduros de plagas
cuarentenarias mediante q-PCR: aspectos técnicos y

moleculares de los kits utilizados en Chile

Diego von Bernath P., Claudio Navarro M. y Cristóbal Martínez B.*

INBIO Soluciones Biotecnológicas
*Correspondencia: cmartinez@inbio.cl

Durante la presente temporada 2021, casi por finalizar el uso de dos cebadores o partidores monohebra con
a la semana 38, las exportaciones chilenas de cítricos orientación 5’ a 3’ (notación utilizada para señalar los extremos
alcanzan las 35.000 toneladas, con un 86% destinado al de una hebra de ADN y para indicar la direccionalidad de
mercado de Estados Unidos (ASOEX - EXPORDATA). En la amplificación), y que permiten seleccionar la región de
este contexto, se hace evidente la necesidad de contar con ADN a amplificar. La técnica comprende además el uso de
buenos sistemas de detección de estados inmaduros de una enzima que tiene la capacidad de polimerizar ADN
plagas cuarentenarias con el objetivo de evitar rechazos y que es estable a altas temperaturas, siendo la proteína
causados por problemas de identificación de especies. más utilizada aquella aislada del microorganismo Thermus
Algunas técnicas de biología molecular, tales como el PCR aquaticus (Taq Polimerasa). Por otra parte, se denominan
convencional y q-PCR (Deepak et al., 2007) se convierten en marcadores moleculares aquellas regiones del ADN que son
poderosas herramientas para la identificación de especies, característicos de un grupo de individuos (especie, género,
y en particular de estados inmaduros difíciles de identificar familia, etc.) y que permiten su identificación, incluso
morfológicamente, permitiendo reducir los rechazos en el respecto a otras especies cercanamente emparentadas.
programa de Pre Embarque SAG/USDA - APHIS/ASOEX. Éstos son ampliamente usado en la identificación molecular,
no solo en insectos sino que en la identificación de una gran
Es por lo anterior que el Comité de Cítricos - ASOEX, impulsa variedad de especies de virus, bacterias, insectos, plantas y
con el apoyo de la Fundación para la Innovación Agraria otros organismos superiores (Grover y Sharma, 2016).
(FIA) y con el Instituto de Investigaciones Agropecuarias
(INIA), como entidad investigadora, un proyecto para Dos de los marcadores moleculares más utilizados para
desarrollar técnicas de PCR utilizando marcadores la identificación molecular de especies de insectos, por
moleculares para la identificación inequívoca de estados la divergencia de su secuencia aún en especies muy
inmaduros de curculiónidos, los cuales no son diferenciables cercanas filogenéticamente, son las regiones intergénicas
morfológicamente. Este proyecto se suma al proyecto de los RNAs ribosomales, conocidas como ITS1 e ITS2, y
INNOVA - CORFO, liderado por Fundación para el Desarrollo la región de la citrocromo oxidasa I (COI). Ambos kits de
Frutícola (FDF) para la identificación inequívoca de estados identificación utilizados en los sitios de inspección de
inmaduros de algunas especies de Pseudocóccidos. fruta fueron diseñados en la región ITS (Figura 1A) y se
basan en la técnica de PCR en tiempo real o cuantitativo
La reacción en cadena de la polimerasa (“Polymerase Chain (qPCR por sus siglas en inglés) con sondas de hidrólisis
Reaction”, PCR) corresponde a una técnica ampliamente usada (ej: TaqMan). Particularmente utilizan una variante del
en biología molecular para la generación de múltiples copias qPCR-TaqMan en la que se puede analizar más de una muestra
de regiones de ADN. En su versión tradicional, comprende por pocillo (qPCR multiplex), para lo que se utilizan sondas

111
REVISTA DE CITRICULTURA 2(2). 2021.