Page 114 - Revista de Citricultura Eureka! Noviembre 2021

NOTAS TÉCNICAS

especializado realiza la extracción de ADN, proceso que de ADN monohebra de 18–24 nucleótidos de largo,
puede demorar de 20 a 25 min para una muestra (Figura 2). con especificidad sobre una zona interna de la región
En caso de haber múltiples muestras el tiempo del proceso específica a amplificar, y que en un extremo tiene asociado
aumenta, debido a que es necesario fijar cada muestra en un molécula que emite fluorescencia, y el otro extremo
un Biostamp (tira de papel que al estar en contacto con el un “apagador” (o quencher) que bloquea la emisión de
agua se vuelve pegajosa y permite fijar la muestra), una vez la molécula fluorescente. De esta forma la emisión de
que se tienen todas las muestras, el proceso de extracción fluorescencia, permite la identificación del marcador
de ADN se realiza en tubos independientes pero en molecular correspondiente a la especie en estudio, y con
simultáneo. El resultado de este proceso es una solución ello la identificación inequívoca.
que contiene el material genético concentrado, el cual es
diluido para ser parte de la reacciones de los mix q-PCR de En breve, el q-PCR-Taqman consiste en aplicar de manera
los kits antes descritos. cíclica distintas temperaturas que permiten a la enzima
polimerasa generar más copias de ADN. Para esto, la
Una vez terminada la extracción de ADN, este material mezcla de reacción cuenta con todos los componentes
puede ser utilizado para realizar el PCR (Figura 3). La necesarios (enzima, nucleótidos, partidores, sondas y
técnica q-PCR-TaqMan es similar a una reacción de PCR algunas sales). En el caso del kit de chanchitos blancos,
tradicional, pero que incluye adicionalmente el uso de en una primera instancia, se aplica una temperatura de
una sonda Taqman, correspondiente a un fragmento 95 °C por 10 minutos, esto permite desnaturalizar todo

Figura 3. Esquema del programa de PCR de Pseudocóccidos y los cambios que ocurren en el ADN y otros reactivos del kit.
Durante la elongación, la enzima polimerasa degrada la sonda TaqMan, liberando el fluoróforo (en verde) de la molécula
apagadora (en negro) y permitiendo que pueda ser detectado por el equipo, esto es lo que permite relacionar fluorescencia
con amplificación de ADN.

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REVISTA DE CITRICULTURA 2(2). 2021.