Page 117 - Revista de Citricultura Eureka! Noviembre 2021

NOTAS TÉCNICAS

mucha información al encargado de la técnica y permiten LITERATURA CITADA
discernir si los resultados son o no concluyentes. Para el
control positivo, la ausencia de amplificación podría indicar ASOEX – EXPORDATA (2021). Asociación de Exportadores de
una falla en el trabajo del usuario al preparar la reacción o Frutas de Chile A.G. EXPORDATA. Revisado octubre 2021.
problemas con la mezcla de reacción o equipo. En el caso
del control negativo, una amplificación en C tempranos, Deepak, S., Kottapalli, K., Rakwal, R., Oros, G., Rangappa,
T
podría indicar la presencia de un contaminante o artefactos K., Iwahashi, H., Masuo, Y., & Agrawal, G. (2007). Real-Time
generados por los materiales utilizados (como el uso de PCR: Revolutionizing Detection and Expression Analysis
plásticos no adecuados). En algunas oportunidades, es of Genes. Current genomics, 8(4), 234–251. https://doi.
probable que el control negativo presente señales en C org/10.2174/138920207781386960
T
tardíos, debido a la presencia de reacciones inespecíficas, las
cuales pueden ocurrir debido al diseño de la reacción, sobre Grover, A. and Sharma, P.C. (2016). Development and use of
todo cuando se realizan reacciones múltiplex o cuando la molecular markers: past and present. Crit Rev Biotechnol. 36(2):
calidad de los componentes se ha deteriorado. Si bien el 290-302. doi: 10.3109/07388551.2014.959891.
equipo no permite determinar la causa de alguno de estos
problemas, la experiencia del usuario y algunas herramientas Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., & Williams, P. M. (1996). Real time
del software, como el análisis de la fluorescencia bruta, quantitative PCR. Genome research, 6(10), 986–994. https://doi.
permiten tomar decisiones correctas para dar validez a los org/10.1101/gr.6.10.986
resultados.

Para finalizar el proceso, se debe realizar la identificación
de las muestras analizadas. En la Figura 4A, se puede ver
el resultado de una corrida real de Pseudocóccidos (en
escala logarítmica). Las curvas color celeste corresponden
a los controles positivos, las verdes a los negativos y las
rojas a las muestras analizadas. Es posible ver el ruido
en los ciclos iniciales y cómo las muestras y controles
positivos sobrepasan el nivel umbral. La Figura 4B muestra
la curva de amplificación (en escala linear) de una muestra
y el control negativo con los parámetros correctamente
elegidos. Es posible ver que solo hay dos curvas de
amplificación, correspondientes al control endógeno y a
P. longispinus, lo que permite realizar la identificación de
la muestra problema.

Es de esta forma, pasando desde la identificación de la
muestra problema, extracción de DNA, mezcla de reactivos
del kit de q-PCR y posterior análisis en el equipo de q-PCR,
es que se puede determinar inequívocamente la especie
problema, sin poner en peligro el programa de Pre-
Embarque SAG/USDA - APHIS/ASOEX.

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REVISTA DE CITRICULTURA 2(2). 2021.