Page 112 - Revista de Citricultura Eureka! Noviembre 2021

NOTAS TÉCNICAS

Figura 1. A) Esquema general de la organización de los genes ribosomales de insectos (genes 28s, 18s y 5.8s), así como las
secuencias intergénicas altamente variables correspondientes a ITS1 e ITS2. B) Esquema general de los partidores y sondas
utilizados en el kit de Curculiónidos.

específicas marcadas con distintas moléculas que emiten DETECCIÓN DE PSEUDOCÓCCIDOS
fluorescencia a distintas longitudes de onda, lo que entrega
gran especificidad de la detección (Deepak et al., 2007). De igual manera, el kit de detección de Pseudocóccidos
fue diseñado en la región ITS y con un control endógeno
DETECCIÓN DE CURCULIÓNIDOS interno en el gen ribosomal 28S. Debido que los equipos
de qPCR cuentan con un número reducido de canales de
En el kit de detección de curculiónidos las sondas y lectura de marcas fluorescentes (entre 1 y 5 comúnmente),
partidores especie específicos, fueron diseñadas en la y a la necesidad de detectar seis distintas especies más un
región ITS, mientras que la región endógena, común control positivo, el kit comprende el uso de tres mezclas
para todas las especies y que actúa como control de reacción. De esta forma, el Mix A permite la detección
positivo interno, corresponde a una región del gen del control positivo (28S), P. meridionalis y P. viburni. El
ribosomal 18S (Figura 1B). Este kit permite identificar Mix B está diseñado para detectar P. calceolariae y P. citri.
estados inmaduros de las especies Naupactus cervinus y Finalmente, el Mix C permite la detección de P. cribata y P.
Naupactus xanthographus, este último cuarentenario para longispinus (Tabla 1).
el mercado de Estados Unidos (Tabla 1). Debido a que
se requiere discriminar entre dos especies de insectos, PASOS DE LA Q-PCR-TAQMAN
más un control positivo interno, este kit comprende solo
un mix de reacción, donde la secuencia de partidores y El primer paso para realizar cualquier experimento de PCR,
sondas, así como su proporción permite la identificación es contar con el material genético que se quiere identificar.
especifica de la muestra utilizando un equipo qPCR que Es por esto que luego de la detección de algún estado
permite la detección de las señales emitidas por las inmaduro en los sitios de inspección, la muestra es enviada
sondas específicas de cada especie. a los laboratorios de PCR en tiempo real, donde personal

112
REVISTA DE CITRICULTURA 2(2). 2021.